Το Staphylococcus haemolyticus είναι ένα θετικό Gram-θετικό-αρνητικό βακτήριο που είναι πολύ συνηθισμένο στα νοσοκομεία. Τα τελευταία χρόνια, οι λοιμώξεις που έχουν αποκτηθεί από το νοσοκομείο έχουν λάβει αυξανόμενη προσοχή λόγω του υψηλότερου κινδύνου τους. Το Staphylococcus haemolyticus μπορεί να προκαλέσει περαιτέρω λοιμώξεις από το δέρμα, μηνιγγίτιδα, περιτονίτιδα και ακόμη και σήψη. Οι καθυστερήσεις στην κλινική διάγνωση μπορούν να οδηγήσουν σε επιδείνωση της κατάστασης της υγείας, οπότε η ταχεία διάγνωση του S. haemolyticus είναι το κλειδί για την ακριβή θεραπεία.
Η ερευνητική ομάδα του δασκάλου Ji Tuo από το Κεντρικό Τμήμα Εργαστηρίου του Νοσοκομείου Δεύτερου Λαϊκού του Lianyungang της Κίνας δημοσίευσε ένα άρθρο "γρήγορη και οπτική ανίχνευση του Staphylococcus haemolyticus σε κλινικά δείγματα με MIRA-LFS" στο περιοδικό "Analytica Chimica Acta", με παράγοντα αντίκτυπου 6.2.
1. Επισκόπηση έρευνας
Σε αυτή τη μελέτη, δημιουργήθηκε μια μέθοδος MIRA-LFS που βασίζεται στο γονίδιο MVAA για την ανίχνευση του Staphylococcus haemolyticus. Η τεχνολογία MIRA της ισοθερμικής ταχείας νουκλεϊκού οξέος πολλαπλών ενζύμων συνδυάστηκε με LFS δοκιμής πλευρικής ροής για να επιτευχθεί ταχεία ανίχνευση παθογόνων.
Το πείραμα διεξήχθη σε 37 βαθμούς και τα αποτελέσματα θα μπορούσαν να ανιχνευθούν εντός 9 λεπτών. Η ευαισθησία ανίχνευσης ήταν 0. 147CFU/αντίδραση.
Η μέθοδος ανίχνευσης MIRA-LFS είναι κατάλληλη για την ανίχνευση σταθερού σημείου του Staphylococcus hemolyticus σε κλινικά δείγματα, πραγματοποιώντας τη μέθοδο POCT για τον εντοπισμό του αιμολύματος Staphylococcus, η οποία έχει μεγάλη αξία για τη διάγνωση και τη θεραπεία των ασθενειών σε περιοχές με υποεξυπηρετούμενες ιατρικές υπηρεσίες.
Η ερευνητική ομάδα χρησιμοποίησε MIRA-LFS, qPCR και παραδοσιακές μεθόδους βακτηριακής καλλιέργειας για να αναλύσει 95 τυχαία κλινικά δείγματα και επιβεβαίωσε την κλινική δυνατότητα εφαρμογής.
2. Μεθόδους έρευνας
Το σχηματικό διάγραμμα της ανίχνευσης MIRA-LFS παρουσιάζεται παραπάνω.
Η έρευνα χρησιμοποίησε το ϋΝΑ ισοθερμικό κιτ Rapid Aplification του Biotech της βιοτεχνολογίας AMP (τύπος δοκιμής κολλοειδούς χρυσού) και λωρίδες δοκιμής ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος.
Το μήκος του εκκινητή γονιδίου MVAA είναι 30-35 νουκλεοτίδια και το μήκος του προϊόντος ενίσχυσης είναι 100-350 bp. Σχεδιάστηκαν συνολικά 6 ζεύγη υποψήφιων εκκινητών. Η ανάλυση MIRA διεξήχθη χρησιμοποιώντας GDNA των τυπικών στελεχών αιμολυτικού σταφυλόκοκκου, υποβλήθηκαν υποψήφιοι εκκινητές και εμφανίστηκαν προϊόντα ενίσχυσης χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης 2%.
Στη συνέχεια, σχεδιάστε τον ανιχνευτή με βάση την ακολουθία εκκινητή προς τα εμπρός (που εκτείνεται 16 bp προς τα πίσω). Το 5 'άκρο του καθετήρα επισημάνθηκε με FITC και το 3' άκρο επισημάνθηκε με μπλοκάρισμα C3. Χρησιμοποιήστε το THF για να αντικαταστήσετε το 31 νουκλεοτίδιο στον ανιχνευτή. Το THF είναι 30 bp από το τέλος των 5 'και 15 bp από το 3' άκρο. Το 5 'άκρο του επιλεγμένου αντίστροφου αστάρι επισημαίνεται με βιοτίνη.
Επιπλέον, η ερευνητική ομάδα βελτιστοποίησε τις συνθήκες αντίδρασης για την ανίχνευση MIRA-LFS του Staphylococcus Hemolyticus. Δοκιμάστε σε 37 βαθμούς κατά διαστήματα 2 λεπτών από 4 έως 12 λεπτά. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται σε χρόνο αντίδρασης 8 λεπτών και η γραμμή δοκιμής είναι σαφώς ορατή. Επιπλέον, οι δοκιμές διεξάγονται κατά διαστήματα 5 μοιρών από 22-52 βαθμό. 37-42 Το βαθμό είναι η πιο κατάλληλη θερμοκρασία για την ανίχνευση MIRA-LFS. Επομένως, ο βέλτιστος χρόνος αντίδρασης και θερμοκρασία της μεθόδου MIRA-LFS για το Staphylococcus haemolyticus είναι 8 λεπτά και 37 βαθμοί αντίστοιχα. Μαζί με το τελικό αποτέλεσμα που απεικονίζεται με LFS εντός 1 λεπτού, ο συνολικός χρόνος ανίχνευσης είναι 9 λεπτά.
3. Εκπαιδευτικά αποτελέσματα
Επαλήθευση ευαισθησίας
Η δοκιμασία MIRA-LFS διεξήχθη σε διαφορετικές συγκεντρώσεις γονιδιωματικού ϋΝΑ (gDNA) που ελήφθη από σειριακά αραιωμένες καλλιέργειες Staphylococcus haemolyticus (1 {{3}^{{2}^0 cfu/ml).
Η πιθανή ανάλυση παλινδρόμησης μονάδας έδειξε ότι η 95% LOD που προσδιορίστηκε με τη δοκιμασία MIRA-LFS ήταν 0. 147 CFU/αντίδραση.
Εξειδικευμένη επαλήθευση
Με την ανάλυση 18 κοινών παθογόνων μικροβιακών στελεχών και 15 κλινικά στελέχη Staphylococcus haemolyticus, προσδιορίστηκε η εκλεκτικότητα της ανίχνευσης του staphylococcus haemolyticus. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η δοκιμή MIRA-LFS ήταν αρνητική για 18 άλλα παθογόνα βακτήρια και θετικά για 15 επαληθευμένα κλινικά δείγματα Staphylococcus haemolyticus.
Η ανίχνευση MIRA-LFS είναι εξαιρετικά επιλεκτική και κατάλληλη για τον έλεγχο του αιμολυτικού Staphylococcus.
Πραγματική δοκιμή δειγμάτων
Το Lianyungang Second People's Hospital συγκέντρωσε τυχαία 95 δείγματα, συμπεριλαμβανομένων 35 δειγμάτων δέρματος και μαλακών ιστών, 16 δείγματα ούρων, 14 δείγματα πτυέλων και 30 δείγματα αίματος.
Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η μέθοδος ανίχνευσης ήταν 100% σύμφωνη με τη μέθοδο qPCR. Επιπλέον, σε σύγκριση με το χρυσό πρότυπο (GB/T4789. Αυτά τα αποτελέσματα επαλήθευαν περαιτέρω την τεχνική σκοπιμότητα αυτής της μεθόδου στην ανίχνευση του Staphylococcus Hemolyticus σε κλινικά δείγματα.
Η μέθοδος MIRA-LFS χρησιμοποιείται για την ταχεία ανίχνευση POCT του Staphylococcus Hemolyticus. Είναι αποτελεσματικό, ακριβές, απλό και χαμηλό κόστος και βοηθά στη λήψη αποφάσεων ταχείας διάγνωσης και θεραπείας.
Μάθετε για την τεχνολογία Mira
Η τεχνολογία ισοθερμικής ταχείας νουκλεϊκού οξέος AMP-future ενισχύει τα νουκλεϊκά οξέα σε σταθερή θερμοκρασία 39 βαθμών -42 βαθμό, με χρόνο αντίδρασης μόνο {{4}. Επιπλέον, δεν απαιτούνται αυστηρές εργαστηριακές συνθήκες και τα σενάρια εφαρμογής διαφοροποιούνται: Γενικά νοσοκομειακά εργαστήρια, πρωτοβάθμια περίθαλψη, δοκιμές στο σπίτι, πεδία κ.λπ.
Οι μορφές προϊόντων αντιδραστηρίων είναι ποικίλες: σκόνη που έχει λυθεί με κατάψυξη, μικροσφαίρια που έχουν αποξηραθεί κατά ψεύτικο κ.λπ. Τα αποτελέσματα της εμφάνισης είναι ποικίλα: η ηλεκτροφόρηση πηκτής, η καμπύλη φθορισμού, οι κολλοειδείς λωρίδες δοκιμής χρυσού κλπ. Το αντιδραστήριο έχει σταθερή απόδοση, είναι εύκολο να λειτουργήσει και είναι βολικό για αποθήκευση και μεταφορά.
Με την τεχνολογία MIRA ως πυρήνα πλατφόρμας, έχει αναπτύξει μια σειρά προϊόντων υποστήριξης όπως η "εξαιρετικά γρήγορη τεχνολογία απελευθέρωσης νουκλεϊνικού οξέος", η "συσκευή ανίχνευσης διπλού καναλιού, η" ενσωματωμένη πλήρως αυτόματη κλειστή ανίχνευση "," αυτο-δοκιμή συσκευή ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος "κλπ.